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鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原的方法

更新時(shí)間:2019-04-28      點(diǎn)擊次數(shù):1693
       鮭魚ELISA試劑盒常用于檢測(cè)ELISA法定量測(cè)定血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中的含量,那么如何使用鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原,常用的方法有雙抗體夾心法,下面我們來仔細(xì)說說。
1. 包被:用0.05M PH9,碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過一晚上。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
     以上就是鮭魚ELISA試劑盒檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法,希望對(duì)大家的檢測(cè)有所幫助。

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