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上海萊嵐教您基因擴(kuò)增PCR儀的使用方法

更新時間:2014-04-29      點(diǎn)擊次數(shù):2564

基因擴(kuò)增PCR儀的使用方法:

PCR由變性--退火(復(fù)性)--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:

①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至90~95℃一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;

②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55~60℃,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;

③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在DNA聚合酶的作用下,于70~75℃,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。

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